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    鎘積累的水稻對粘蟲幼蟲的影響研究

    來源:環境昆蟲學報 作者:陳雨萌,黃江南,商小蘭
    發布于:2021-07-22 共9198字

      摘    要: 水稻中重金屬積累如何影響水稻害蟲尚不清楚,本文擬探討鎘積累的水稻對粘蟲Mythimna separata幼蟲的影響。通過測定不同濃度氯化鎘處理的水稻以及人工飼料對粘蟲幼蟲生長發育的影響,并進一步研究了氯化鎘處理水稻中粘蟲誘導的防御化合物含量的變化。研究表明水稻葉片中鎘的積累導致粘蟲幼蟲生長減慢、死亡率上升。不同濃度鎘處理可以顯著提高粘蟲誘導的酚胺類化合物對香豆酰腐胺、阿魏酰腐胺、肉桂酰腐胺以及阿魏酰胍丁胺的含量。不同濃度鎘添加的人工飼料對粘蟲幼蟲的存活率無顯著影響,而粘蟲幼蟲取食1 μmol/L和10 μmol/L氯化鎘添加的人工飼料后體重反而高于取食未含鎘的人工飼料。綜上所述,鎘積累提高了水稻中粘蟲誘導的防御化合物的含量以及對粘蟲的抗性,研究結果有利于加深水稻與不同環境脅迫關系的認識。

      關鍵詞 :     水稻;粘蟲;鎘;防御反應;酚胺類化合物;

      Abstract: Whether heavy metal accumulation in rice could influence rice pests remains unclear. We aim to explore rice resistance to Mythimna separata larvae (armyworm) under cadmium accumulation. The armyworm performances on CdCl2-treated plants and artificial diet were conducted. Meanwhile, the armyworm-elicited defensive compounds accumulations in rice were measured after different CdCl2-treatments. The larvae mass and survival rate of armyworm was significantly decreased on Cd-treated plants compared with control plants. Moreover, the armyworm-elicited four phenolamides, p-Coumaroyl puthescine, Feruloyl putrescine, Cinnamoyl putrescine and N-feruloyl agmatine, levels were significantly increased in Cd-treated plants compared with control plants. However, the survival rate of armyworm did not differ between Cd-treated and control artificial diet, and armyworm larvae gained more weight when feeding on 1 μmol/L and 10 μmol/L Cd-treated artificial diet than that on control artificial diet. Our results indicated that cadmium accumulation enhanced armyworm-elicited defensive compounds levels and rice resistance to armyworm. This study increased our understanding of interactions between rice and different environmental factors.

      Keyword: Rice; Mythimna separata; cadmium; defense response; phenolamides;

      隨著現代工業化和城市化進程的加速,工業“三廢”排放、農藥化肥濫用以及生活垃圾丟棄等因素導致我國部分耕地和水域重金屬含量超標。與其他形式的環境污染不同,重金屬污染具有隱蔽性、長期積累、不可逆轉和難以生物降解等特點。土壤中重金屬隨著植物根系吸收進入地上部分其他組織中影響植物正常的生長發育,并通過食物鏈傳遞影響植食性昆蟲等初級消費者(Morkunas et al., 2018)。
     

    鎘積累的水稻對粘蟲幼蟲的影響研究
     

      重金屬在植物體內積累可通過兩方面影響植食性昆蟲。一是植食性昆蟲取食含有重金屬的植物組織后導致重金屬在體內的積累,從而對其存活率、繁殖力以及生長發育造成顯著性的影響(Chen et al., 2020)。另有報道表明,重金屬在植物中積累可誘導植物的防御反應。如玉米體內銅的積累可以增強斜紋夜蛾Spodoptera litura誘導的茉莉酸信號分子以及揮發性物質的含量,從而增強了玉米對斜紋夜蛾的抗性(Winter et al., 2012)。鋅和鎘同時處理鼠耳芥Arabidopsis halleri增強了韌皮部中桃蚜Myzus persicae誘導的芥子油苷的含量(Stolpe et al., 2017)。水稻作為我國最主要的糧食作物之一,在自然的生長情況下經常遭受植食性昆蟲的為害,然而水稻中重金屬積累是否影響水稻害蟲還不清楚。

      鎘作為最重要的環境污染物之一,具有潛在的高毒性和移動性(Ding et al., 2013)。自然界中鎘主要以正二價的形式存在,少數為正一價,不同存在形式鎘的毒性不同(Mircic et al., 2013)。研究表明,鎘在水稻體內積累可以影響水稻生長發育,破壞水稻產量和品質(Hussain et al., 2021)。另據報道,水稻害蟲褐飛虱Nilaparvata lugens體內檢測到的重金屬的含量與當地稻田的重金屬含量成正比(Wan et al., 2014),表明鎘可以通過水稻的傳遞進入水稻害蟲體內。粘蟲Mythimna separata是一種多食性害蟲,尤其喜食禾本科植物,嚴重威脅著玉米、小麥、水稻等糧食作物的生產安全。本研究利用不同濃度的鎘處理水稻,觀察粘蟲幼蟲在水稻上生長發育的變化;同時以含不同濃度鎘的人工飼料飼喂粘蟲幼蟲,探究鎘對粘蟲的直接影響;最后通過檢測粘蟲幼蟲在不同鎘處理水稻上誘導的防御化合物含量的變化推斷其可能的作用機理。

      1 、材料與方法

      1.1、 供試昆蟲

      粘蟲卵購于科云生物農藥有限公司 (河南濟源)。將卵塊放置于28 ± 2℃,光照:黑暗=14 h : 10 h,光照40%的培養箱(寧波江南儀器廠)中進行孵化,篩選出活性良好、大小一致的初孵幼蟲用于生物測定。

      1.2 、植物材料及生長條件

      水稻品種為粳稻秀水11,購于浙江勿忘農種業股份有限公司。種子于水中萌發,置于28 ± 0.5℃,光照:黑暗=14 h : 10 h,光照強度為40%的培養箱(寧波江南儀器廠)進行培養。8 d后采用水培液培養(Li et al., 2015),21 d后用于實驗。

      1.3、 鎘含量的測定

      植物中鎘的正常積累量為0.1~3 mg/kg干重,參考先前水稻中鎘處理的研究報道(Hussain et al., 2021),本研究將21 d大小的水稻分別種植于含有0、0.01、0.1、1、10 μmol/L氯化鎘的水培液中,每個濃度設置5個重復。7 d后取適量水稻葉片,放置于105℃烘箱中處理1 h,然后60℃處理24 h,樣品用液氮研磨成粉末狀。粘蟲人工飼料的配制參考Jia(2019)的方法,配制含0、0.1、1、10 μmol/L氯化鎘的粘蟲人工飼料,不同鎘添加的人工飼料對照樣品采用上述同樣方法制備。樣品鎘含量測定采用四酸消解法進行。稱取0.3 g液氮研磨后的樣品置于聚四氟乙烯消解罐內,加入5 mL硝酸,110℃預消解30 min,隨后采用微波消解儀(上海屹堯TOPEX)進行密閉消解,具體程序為:120℃消解3 min,150℃消解3 min,170℃消解3 min,200℃消解30 min。消解后的溶液經冷卻后轉移至50 mL容量瓶中,加入少量水洗滌消解罐數次,將洗滌液合并至容量瓶中,加水稀釋至刻度線,混勻后用0.22 μmol/L濾膜進行過濾。采用相同方法制備對照溶液。樣品用電感耦合等離子體質譜ICP-MS(PerkinElmer NexION 300X型)進行分析。ICP-MS條件為:射頻功率:1 300 W;等離子體氣流:17 L/min;霧化氣流量:0.96 L/min;輔助氣流量:1.20 L/min;氧化物:CeO/Ce≤2.5%;雙電荷Ce2+/Ce≤3.0%;測定模式:KED模式;氦氣流速:3.0 mL/min;積分時間:1 000 ms;重復次數:3次。

      1.4 、粘蟲生物測定

      將21 d大小的水稻種植于含有0、1、10 μmol/L氯化鎘的水培液中,每個濃度5個生物學重復,每組4株水稻。在含不同濃度鎘的水培液中處理7 d以后,每株水稻相同葉位上接2頭初孵幼蟲。10 d后,統計每組粘蟲存活數量,同時稱量存活粘蟲的體重。取大小為2×1 cm3人工飼料放置于廣口瓶中,每個瓶中放入5頭初孵幼蟲,用紗網(長×寬=12 cm×12 cm)封住瓶口,置于28 ± 0.5℃的黑暗培養箱中。每2 d更換飼料,粘蟲進入暴食期后,每天更換飼料,并及時清理糞便。每種人工飼料設置4個重復。9 d后稱量幼蟲體重,并觀察和記錄每組幼蟲的死亡情況。

      1.5、 酚胺類物質的測定

      昆蟲口腔分泌物中的小分子或蛋白可被植物細胞膜表面的受體所識別并啟動下游的防御反應(Erb and Reymond, 2019),為了得到均一的生物學重復,通常利用機械損傷并涂抹昆蟲口腔分泌物來模擬植食性昆蟲的取食(Xu et al., 2021)。將21 d大小的水稻種植于含有0、1、10 μmol/L氯化鎘的水培液中,每個濃度5個生物學重復。處理7 d后,每株水稻第一個完全展開的葉位用潔凈的齒輪進行損傷并在傷口處涂抹粘蟲口腔分泌物來模擬粘蟲取食。48 h后收集處理葉片,用液氮磨成粉末狀,并稱量50 mg左右用于酚胺類化合物的測定,測定方法參照Xu等(2021)。

      1.6 、數據分析

      數據分析采用Data Processing System (DPS v16.0)軟件。其中,鎘含量、酚胺化合物含量及粘蟲生長量分析采用學生氏t檢驗,粘蟲存活率分析采用卡方檢驗及Bonferroni兩兩比較。

      2、 結果與分析

      2.1、 不同水培液鎘濃度處理對水稻體內鎘積累的影響

      水稻采用水培的方法種植,在水培液里加入不同濃度的氯化鎘后,水稻葉片中鎘積累的濃度與水培液鎘處理的濃度呈正相關(圖1)。其中1 μmol/L氯化鎘處理后葉片中鎘的含量可以達到0.97 mg/kg干重,而10 μmol/L氯化鎘處理后葉片中鎘的含量高達1.89 mg/kg干重。

      圖1 不同濃度鎘處理后水稻葉片中鎘的積累
    圖1 不同濃度鎘處理后水稻葉片中鎘的積累

      Fig. 1 Cadmium accumulation in the rice leaf after different treatment

      注:圖中數值為鎘含量的平均值±標準誤(n=5)。水稻幼苗在不同濃度CdCl2的水培液中生長。DM表示干重。Note: Data in the figure were mean ± SE, standard error (n=5); Rice seedlings were grown in hydroponic cultivation with different concentration of CdCl2. DM, dry mass.

      2.2、 水稻中鎘積累對粘蟲幼蟲抗性的影響

      為了探究水稻鎘積累對粘蟲幼蟲的影響,本研究檢測了粘蟲幼蟲在不同濃度鎘處理的水稻上生長發育的變化。結果表明鎘處理會顯著降低粘蟲幼蟲的生長,1 μmol/L和10 μmol/L氯化鎘處理后水稻上的粘蟲幼蟲的體重較對照組分別下降33.4%和41.6%(圖2-A)。隨著鎘處理濃度的升高,粘蟲幼蟲的存活率呈現下降趨勢,10 μmol/L鎘處理水稻上粘蟲幼蟲的存活率顯著低于對照組(圖2-B)。以上結果表明水稻中鎘積累對粘蟲幼蟲生長發育產生不利影響。

      圖2 不同濃度鎘處理水稻對粘蟲體重(A)和存活率(B)的影響
    圖2 不同濃度鎘處理水稻對粘蟲體重(A)和存活率(B)的影響

      Fig. 2 Mythimna separata larvae mass (A) and survival rate (B) in different cadmium-treated plants

      注:A表示體重的平均值±標準誤(n=9~23),B表示存活率的平均值±標準誤(n=5)。星號代表不同濃度鎘處理間存在顯著差異(*,P<0.05;**,P<0.05;幼蟲體重實驗采用t檢驗,存活率實驗采用卡方檢驗)。Note: A, Mean lavae mass (means ± SE, n=9 ~ 23). B, Survival rate (means ± SE, n=5) in cadmium-treated plants and control plants. The asterisk indicated significant difference between different cadmium-treated plants (*, P < 0.05; **, P < 0.05; Student’s t-test for lavae mass and chi-square test for survival rate experiment).

      2.3 、不同濃度鎘添加人工飼料對粘蟲幼蟲生長發育的影響

      鎘可以通過食物鏈進入昆蟲體內對昆蟲造成直接毒害作用,為了評估鎘對粘蟲幼蟲的直接作用,本研究檢測了粘蟲幼蟲在不同濃度鎘添加的人工飼料上生長發育的變化。人工飼料成品中鎘含量與配制時添加的鎘的濃度呈正相關(圖3-A)。濃度為0.1、1和10 μmol/L氯化鎘添加的人工飼料中鎘的含量可以達到0.07、0.71和6.26 mg/kg干重。其中,1 μmol/L氯化鎘添加的人工飼料和1 μmol/L氯化鎘處理的水稻葉片中積累的鎘的含量相當。粘蟲幼蟲在1 μmol/L和10 μmol/L氯化鎘添加的人工飼料上的體重顯著高于未添加的(圖3-B)。而添加鎘的人工飼料對粘蟲幼蟲的存活率無顯著影響(圖3-C)。上述結果表明水稻鎘積累對粘蟲幼蟲抗性的提高可能不是鎘直接的毒害作用。

      圖3 粘蟲幼蟲在不同鎘添加的人工飼料上的生物測定
    圖3 粘蟲幼蟲在不同鎘添加的人工飼料上的生物測定

      Fig. 3 Mythimna separata larvae performances on cadmium-added artificial diet

      注:A表示不同濃度鎘處理的人工飼料中鎘的含量。B表示粘蟲初孵幼蟲在不同鎘添加的人工飼料上的體重變化。C表示粘蟲初孵幼蟲在不同鎘添加的人工飼料上的存活率。初孵幼蟲接到不同鎘處理的人工飼料上進行取食,9 d后測幼蟲的體重以及統計存活率。每個濃度分為4組,每組5頭幼蟲,星號代表不同濃度鎘處理間存在顯著差異(*,P<0.05,學生氏t檢驗)。Note: A, Levels of cadmium in different cadmium-treated AD, artificial diet. B, Meaned Mythimna separata larvae mass (means ± SE, n=20) on different cadmium-treated AD. C, Survival rate (means ± SE, n=4) on different cadmium-treated AD. The fresh hatched M. separata larvae was allowed to feed on different cadmium-treated AD. The larvae mass and survival rate was recorded after 9 d. Asterisks indicated significant differences between cadmium-treated AD and control AD (*, P < 0.05; Student’s t-test).

      2.4、 水稻中鎘積累對粘蟲幼蟲誘導的酚胺類化合物含量的影響

      植物酚胺類化合物被報道參與了植物對植食性昆蟲的抗性(Kaur et al., 2010)。為了探究鎘是否可以通過誘導水稻的防御反應影響粘蟲幼蟲,本研究檢測了鎘處理后水稻中粘蟲幼蟲誘導的酚胺類化合物的含量。在水稻中,1 μmol/L氯化鎘處理就可以顯著提高粘蟲誘導的對香豆酰腐胺p-Coumaroyl putrescine、阿魏酰腐胺Feruloyl putrescine、肉桂酰腐胺Cinnamoyl putrescine的含量,但阿魏酰胍丁胺N-feruloyl agmatine含量無顯著變化(圖4-A~圖4-D)。10 μmol/L氯化鎘處理的水稻中粘蟲幼蟲誘導的四種化合物的含量均顯著性升高。這些結果表明鎘積累提高了水稻中蟲害誘導的防御化合物的含量。

      圖4 不同鎘處理水稻中粘蟲誘導的酚胺類化合物的含量
    圖4 不同鎘處理水稻中粘蟲誘導的酚胺類化合物的含量

      Fig. 4 Mythimna separata larvae-elicited phenolamides levels in leaves of different cadmium-treated rice

      注:A表示粘蟲誘導的對香豆酰腐胺在不同鎘處理水稻葉片中的含量。B表示粘蟲誘導的阿魏酰腐胺在不同鎘處理水稻葉片中的含量。C表示粘蟲誘導的肉桂酰腐胺在不同鎘處理水稻葉片中的含量。D表示粘蟲誘導的阿魏酰胍丁胺在不同鎘處理水稻葉片中的含量。星號代表不同濃度鎘處理間存在顯著差異(P<0.05,t檢驗)。Note: A, Meaned levels (means ± SE, n=5) of p-Coumaroyl putrescine in Mythimna separata larvae-elicited cadmium-treated plants and control plants. B, Meaned levels (means ± SE, n=5) of Feruloyl putrescinee in M. separata larvae-elicited cadmium-treated plants and control plants. C, Meaned levels (means ± SE, n=5) of Cinnamoyl putrescinee in M. separata larvae-elicited cadmium-treated plants and control plants. D, Meaned levels (means ± SE, n=5) of N-feruloyl agmatine in M. separata larvae-elicited cadmium-treated plants and control plants. The asterisk indicated significant difference between cadmium-treated plants and control plants (*, P < 0.05; **, P < 0.01; Student’s t test).

      3 、結論與討論

      環境中重金屬可通過生產者或者消費者的攝入進入到食物鏈中,各級消費者通過捕食關系使得重金屬在食物鏈中傳遞,其中,植物根系吸收重金屬是最主要的一種途徑。特別對于農作物和經濟作物,重金屬的積累會間接影響人類健康。作為最主要的初級消費者,植食性昆蟲也會受到重金屬的影響。隨取食攝入的重金屬會直接影響昆蟲正常的生理過程,另外有研究表明重金屬積累還會影響植食性昆蟲誘導的植物抗性途徑。因此,研究重金屬-植物-植食性昆蟲之間的關系有重要的生物學意義。本文通過鎘-水稻-粘蟲的研究發現,鎘處理水稻上粘蟲幼蟲的生長變緩并且死亡率提高,同時鎘處理增加了粘蟲幼蟲誘導的酚胺類化合物的含量,說明鎘積累很有可能激活了水稻中蟲害誘導的防御途徑,從而表現出對粘蟲幼蟲的抗性。而同等濃度鎘處理的人工飼料反而促進了粘蟲幼蟲的生長。

      眾多實驗表明,重金屬鎘會破壞植食性昆蟲中腸結構、影響食物的吸收,從而減緩昆蟲的生長。如粉紋夜蛾Trichoplusia ni幼蟲取食高濃度鎘(8.0 ± 2.6 mg/kg干重)添加的人工飼料后發育明顯減緩(Konopka et al., 2013);棉鈴蟲Helicoverpa armigera幼蟲取食高濃度鎘添加的人工飼料,幼蟲體重都顯著降低(Zhan et al., 2017)。土壤中的鎘經紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum傳遞累積到澤蘭實蠅Procecidochares utilis幼蟲體內,引起超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)等保護酶的活性降低,最終導致老熟幼蟲長度和鮮重降低(Ma et al., 2018)。Wei等(2020)也研究了鎘對粘蟲幼蟲的直接影響,發現在人工飼料中加入低濃度(0.15 mg/kg干重)的鎘會抑制粘蟲體重的增加;中濃度(0.3 mg/kg干重)和高濃度(0.6 mg/kg干重)的鎘處理卻增加了粘蟲的體重。然而,中、高濃度的鎘處理減小了蛹的重量以及羽化后成蟲的產卵量,說明不同濃度鎘脅迫對植食性昆蟲的影響各不相同,這與植食性昆蟲類型或昆蟲不同齡期抗脅迫能力也有關聯。在本實驗中,粘蟲幼蟲取食高濃度鎘(0.71 mg/kg干重和6.26 mg/kg干重)人工飼料后體重顯著上升,對比上述報道,人工飼料中鎘積累到一定程度可能促進粘蟲幼蟲的生長發育。取食含高濃度鎘人工飼料的粘蟲體重增加也可能是一種攝食補償策略(Nestel et al., 2016; Wei et al., 2020),即當環境壓力等原因導致昆蟲營養不足時,昆蟲(特別是幼蟲)往往會提高食物攝入量,以此為下一階段的生長發育積蓄能量。鎘積累的水稻植株表現出對粘蟲幼蟲明顯的抗性。一方面,鎘的積累可能提高了水稻中蟲害誘導的防御反應,如抗蟲相關信號途徑的激活以及防御物質的積累。本研究中酚胺類化合物具有抗鱗翅目幼蟲的作用,其在鎘積累水稻中誘導的含量要明顯高于正常水稻。另一方面,植物中鎘可以和蛋白或化合物結合形式螯合形態(Hussain et al., 2021),本研究猜想水稻中積累的鎘可能與一些抗性相關的蛋白或化合物結合形成毒性更強的螯合物而影響其正常的生長發育。

      農業生產中,植物往往同時面臨各種生物與非生物環境因子脅迫,這些脅迫會不僅會對植物產生影響,而且對整個生態系統都能產生復雜而深遠的影響。本研究探討了植物與兩個環境因子—重金屬和植食性昆蟲之間的互作,發現重金屬鎘積累可以提高水稻對粘蟲幼蟲的抗性,鎘介導的水稻抗蟲性的提高可能與水稻中蟲害誘導的防御反應有關。研究結果有利于加深植物與外界環境脅迫關系的認識。本研究中水稻鎘積累的濃度雖然在正常范圍值之內,但鑒于鎘的毒害作用,其對水稻抗蟲性的提高無法被人們所利用。而另一種重金屬鋅具有促進水稻生長發育的功效,已經被用作肥料添加劑。鋅的積累是否也會誘導水稻的抗蟲性還不清楚,本文建立的研究體系可用于后續鋅-水稻-水稻害蟲互作的研究。

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    作者單位:浙江大學昆蟲科學研究所 杭州市農業技術推廣中心 浙江大學農業試驗站 浙江大學農生環測試中心
    原文出處:陳雨萌,黃江南,商小蘭,孫睿,毛黎娟,黃越,尉吉乾.水稻中鎘積累對粘蟲的影響[J/OL].環境昆蟲學報:1-10[2021-07-22].http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1640.q.20210720.1345.012.html.
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